Skip to content

Wirus Zika związany z małogłowiem cd

1 miesiąc ago

468 words

Matka przekazała pisemną świadomą zgodę na publikację tego raportu. Metody
Autopsja i badanie ośrodkowego układu nerwowego (OUN)
Autopsja płodu i łożyska została przeprowadzona 3 dni po zakończeniu ciąży, z obszernym pobieraniem próbek wszystkich narządów, łożyska i pępowiny. Próbki utrwalono w 10% zbuforowanej formalinie i zatopiono w parafinie. Pobrano świeże próbki tkanek do badań mikrobiologicznych. Mózg i rdzeń kręgowy utrwalono w 27% zbuforowanej formalinie przez 3 tygodnie, po czym wykonano badanie neuropatologiczne z szerokim pobieraniem próbek mózgu i rdzenia kręgowego. Skrawki wszystkich próbek tkanek barwiono hematoksyliną i eozyną. Barwienie immunologiczne dla glialowego białka kwasu fibrylarnego, neurofilamentu, ludzkiego antygenu leukocytarnego DR (HLA-DR), CD3 (dla podświetlenia limfocytów T) i CD20 (dla zaznaczenia limfocytów B) przeprowadzono na reprezentatywnych próbkach OUN.
Mikroskopia elektronowa
Tkanka została pobrana z mózgu utrwalonego w formalinie i uległa utrwaleniu w 1% tetratlenku osmu i odwodnieniu w rosnących stężeniach etanolu. Próbka została następnie osadzona w Epon. Wykonano skrawki seryninowe (1,4 um), wybarwiono Azur II i analizowano za pomocą mikroskopii świetlnej. Sekcje ultracienki (60 nm) wybarwiono octanem uranu i cytrynianem ołowiu. Ponadto, mały kawałek mózgu (5 mm3) homogenizowano w buforze. Zawiesinę następnie oczyszczono przez wirowanie z małą prędkością, a otrzymany supernatant został ultrawirowany bezpośrednio na siatkę mikroskopową elektronową za pomocą Airfuge (Beckman Coulter). Negatywne barwienie przeprowadzono za pomocą 1% kwasu fosfowolframowego. Obrazowanie ultracienkich przekrojów i homogenatu mózgu przeprowadzono za pomocą transmisyjnego mikroskopu elektronowego JEM-120 JV-1400Plus (JEOL).
Pośrednia immunofluorescencja
Zatopione w parafinie skrawki tkanki mózgowej płodu i tkanki mózgowej człowieka z autopsją, jako kontrola negatywna, inkubowano z surowicą otrzymaną od matki płodu (rozcieńczenie 1:10), a następnie przeciwciała przeciwko ludzkim IgG znakowane izotiocyjanianem fluoresceiny (FITC ) (rozcieńczenie 1:50). Ponadto tkanka mózgowa płodu była inkubowana z surowicą otrzymaną od zdrowego dawcy krwi, jak również tylko z przeciwciałami IgG znakowanymi FITC.
Badanie mikrobiologiczne
RNA ekstrahowano z 10 mg łożyska, płuc, serca, skóry, śledziony, grasicy, wątroby, nerek i kory mózgowej przy użyciu zestawu do oczyszczania RNA TRIzol Plus (Thermo Fisher Scientific). RT-PCR w czasie rzeczywistym do wykrywania RNA ZIKV (NS5) i jednoetapowej RT-PCR do wykrywania regionu kodującego białko otoczki (360 bp) przeprowadzono w sposób opisany uprzednio. Sekwencjonowanie generacji przeprowadzono w próbkach tkanki mózgowej płodu za pomocą oprogramowania Ion Torrent (Thermo Fisher Scientific) i Geneious, wersja 9.0.6. Odczyty z obu przebiegów połączono i odwzorowano na sekwencję odniesienia (ZIKV MR766; LC002520) z użyciem domyślnych miar. Do analizy filogenetycznej zastosowano kompletne sekwencje genomu ZIKV i przeprowadzono szereg dopasowań sekwencji (ClustalW). Drzewo filogenetyczne łączące sąsiad (model GTR + G + I) zostało skonstruowane przy użyciu systemu oprogramowania MEGA6, 9, aby pokazać relacje filogenetyczne
[hasła pokrewne: vibin mini skutki uboczne Wrocław, triderm masc, vibin mini skutki uboczne ]

0 thoughts on “Wirus Zika związany z małogłowiem cd”

Powiązane tematy z artykułem: ihit warszawa triderm masc vibin mini skutki uboczne